非洲豬瘟檢測(cè)試劑盒廠家【Abakora ibicuruzwa byo muri Afurika byingurube】非洲豬瘟檢測(cè)試劑盒生產(chǎn)廠家選擇風(fēng)途，型號(hào)為FT-ZWSJ2

　　非洲豬瘟是一種非洲豬瘟屬病毒，病毒粒子為20面體對(duì)稱，直徑約200mm。病毒帶有囊膜，分為22個(gè)不同基因型，只有1個(gè)不同的血清型。非洲豬瘟在生豬和野豬的白細(xì)胞都可復(fù)制，尤其是養(yǎng)殖生豬。因?yàn)榉侵挢i瘟病例發(fā)生在1921年的肯尼亞，而后傳播到安哥拉、蘇丹、贊比亞等地，因此被稱為“非洲豬瘟"。非洲豬瘟有著高傳染性，豬群、野豬是主要傳播途徑，無法傳染給狗、貓、羊等動(dòng)物，人也不會(huì)傳染。不過，DNA病毒在兔子體內(nèi)盲傳26代，對(duì)豬依然有致死性。該病有無季節(jié)性、無日齡性特點(diǎn)，全年均可出現(xiàn)，一旦患病將快速傳播導(dǎo)致生豬大批量死亡，健康的生豬感染病毒將迅速暴發(fā)。

　　非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測(cè)試劑盒說明書

　　【獸藥名稱】

　　通用名稱：非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測(cè)試劑盒

　　漢語拼音:Feizliouzhuwen Bingdu Yingguang PCR Hesuan Jianceshijihe

　　英文名稱：African swine Fever Virus (ASFV) PCR Nucleic Acid Diagnostic Kit

　　商品名稱：無

　　【主要成分與含量】試劑盒中含有如下組分:

　　【用法與判定】

　　1 用法

　　1.1待檢樣品釆集、保存及運(yùn)輸

　　1.1.1樣品釆集

　　(1) 活豬樣品 無菌采集抗凝血或血清5mL

　　(2) 病死豬剖檢樣品或屠宰場(chǎng)剖檢樣品 無菌采集死豬的牌、肺、腎、扁桃體、淋巴結(jié)、肌肉等組織樣品。2?8°C低溫運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室用于檢測(cè)。

　　(3) 病豬污染的周邊環(huán)境 采集與病豬相關(guān)場(chǎng)所的糞便、飼料、污水樣品。2?8°C低溫運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室用于檢測(cè)。

　　1.1.2樣品保存 采集的樣品在2?8°C保存應(yīng)不超過24小時(shí)，-70°C條件下保存，避免反復(fù)凍 融。

　　1.1.3樣品運(yùn)輸泡沫箱加冰袋后密封進(jìn)行運(yùn)輸。包裝和運(yùn)輸應(yīng)符合《高致病性動(dòng)  物病原微生物菌(毒)種或者樣品運(yùn)輸包裝規(guī)范》和關(guān)于危險(xiǎn)品運(yùn)輸管理的有關(guān)規(guī)定。

　　1.2樣品處理

　　1.2.1血液樣品處理 抗凝血樣品置于離心管中，8000 r/min離心2分鐘取上層血漿，編號(hào)待 檢。非抗凝血樣品置于離心管中，待凝固后，8000  r/min離心2分鐘取200μL上層血清，編號(hào)待檢。

　　1.2.2組織樣品處理取適量脾臟、肝臟、淋巴結(jié)、扁桃體、肌肉等組織，置于研磨器或研磨管中研磨，再加適量生理鹽水混勻，制成約10%的組織勻漿，8000  r/min離心2分鐘，取200μL上 清于RNase/DNase-free無菌離心管中，編號(hào)備用。

　　1.2.3環(huán)境樣品處理

　　1.2.3.1糞便、飼料樣品處理方法取適量的糞便、飼料放入盛有PBS緩沖液的研磨管中研磨混勻，制成約10%的勻漿液.8000  r/min離心2分鐘，取200μL上清于RNase/DNase-free無菌離心 管中，編號(hào)備用。

　　1.2.3.2污水樣品處理方法 直接取200μL污水進(jìn)行核酸提取。

　　1.3病毒核酸的提取用磁珠法或柱式法進(jìn)行DNA核酸提取。

　　1.4熒光PCR反應(yīng)：

　　1.4.1從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液、酶混合液，室溫融化后，2000 r/min離心5秒。設(shè)被  檢樣品、陽性對(duì)照和陰性對(duì)照總和為n,則反應(yīng)體系配制如下：

　　試劑 體系

　　PCR 反應(yīng)液 17× (n+1) μL

　　酶混合液 3× (n+1) μL

　　1.4.2在新的RNase/DNase-fire 1.5 ml離心管中加入上述試劑，充分混勻后瞬時(shí)離心。按照20μL/  管分裝量將試劑分裝至熒光PCR反應(yīng)管。

　　1.4.3在上述制備好的熒光PCR反應(yīng)管中分別加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照各5μL、處理好的待測(cè)核酸各5μL,終體積25μL/管，蓋好熒光PCR反應(yīng)管蓋，混勻后瞬時(shí)離心，轉(zhuǎn)移到熒光PCR儀器  上。

　　144將PCR反應(yīng)管放置在熒光PCR儀樣品槽中，在熒光PCR儀上運(yùn)行以下程序：

　　熒光通道選擇FAM,在PCR擴(kuò)增階段每個(gè)循環(huán)的55℃時(shí)采集熒光信號(hào)。設(shè)置擴(kuò)增體系為25μL, 同時(shí)要選擇passive  reference和quencher為none的模式。(注：若熒光PCR儀(如AB17500)按說明  書中的反應(yīng)程序設(shè)置后因持溫時(shí)間短無法運(yùn)行，可將預(yù)擴(kuò)增和PCR擴(kuò)增條件變更為95C： 5秒 55°C： 30 秒)